中药对结肠癌细胞P53基因表达影响的研究进度

　　0 引言
　　结肠癌是发生于消化道的常见恶性肿瘤，其发病率呈逐年攀升趋势。结肠癌的发病机制复杂，目前关于结肠癌发病机理的研究重点集中于单基因、细胞因子及蛋白表达等方面。抑癌基因P53 与人类恶性肿瘤的发生密切相关，是当前结肠癌病理机制研究的热点，对P53 基因的深入研究有利于探索结肠癌的分子生物学机理，并为结肠癌的诊疗提供理论指导。结肠癌的治疗，目前仍以手术、放化疗为主，其治疗效果单一、不良反应较多。中医中药的应用不仅可以缓解西医治疗结肠癌所伴随的不良反应，且能增强机体抗病能力，抑制肿瘤生长，改善病情。采取中西医结合方法治疗结肠癌，能够减低毒副反应，提高患者对化疗的耐受力，改善治疗效果。本文就近几年来关于中药对结肠癌细胞P53 基因表达的影响研究做简要综述。
　　1 P53 与结肠癌
　　1.1 P53 基因结构及功能
　　人类P53 基因包含10 个内含子和11 个外显子，位于人类的第17 号常染色体上(17p 13.1)，基因全长约16-20 kb，其编码的P53 蛋白，相对分子量为53 kb，是与细胞分裂周期相关的含393 个氨基酸的核酸蛋白质。P53 基因分野生型(WTP53) 和突变型(MTP53) 两型，正常细胞中的野生型P53基因表达的P53 蛋白不仅含量少，而且半衰期较短，临床试验通常难以检测;突变型P53 基因表达的P53 蛋白半衰期相对较长，大多试验中检测到的P53 蛋白通常被认为是突变型P53 蛋白。P53 通过直接参与或间接调控的方式操纵靶基因，影响细胞周期，控制细胞生长、增殖，维持相关基因的表达，抑制细胞恶性增殖及癌变。抑癌基因WTP53 参与细胞的增殖、分化及DNA 损伤修复等诸多过程，其可通过抑制相关酶的活性阻碍细胞分裂，抑制其增殖。WTP53 能使损伤细胞阻滞于G1 期，使损伤DNA 得以及时修复，若修复过程难以顺利完成，则损伤细胞被诱导发生程序性凋亡以防止其进一步恶性增殖。
　　1.2 P53 基因突变与结肠癌的关系
　　P53 基因在结肠癌中突变率极高，其第175、245、248、249、273 和282 位等6 个位点的突变率最高，约为总突变的75 %，与结肠癌相关的42 个点突变主要集中于第90   289 之间，其第170   280 为高变区。 通过对下游靶基因的表达调控，影响细胞分化，促成肿瘤的发展。若基因由野生型转变为突变型，原癌基因便得以激活，成功表达相关产物[7]，最终导致结肠癌的发生;另外，突变型P53基因还能削弱野生型P53 基因对肿瘤细胞的抑制能力，促进结肠癌的发生。若WTP53 缺乏或突变为MTP53，将失去对损伤细胞的免疫监视功能，损伤细胞无法停留在G1 期进行DNA 修复，进一步恶性增殖。大量实验证明，基因在结肠癌的发生中扮演着重要角色。马鹏等提出，基因的异常表达是结肠癌癌前病变和异常增生的重要影响因素。李铁灵等的实验证明，基因的表达水平与淋巴转移及远处转移具有相关性，P53 基因可作为结肠癌预后评估的参考因素。
　　1.3 P53 信号通路对结肠癌的影响
　　P53 通过多种方式参与细胞分化、增殖，调控结肠癌的发病。Song 等提出，突变型P53 可能通过影响MRN-ATM 及TGF- 信号转导过程，促进肿瘤的发生。ARMSTRONG等在研究中发现，P53 能诱导NF-ҝB 的活化，诱导细胞死亡。GAVERT观察分析得出，NF-ҝB 的活性异常是结直肠癌发生进展的主要事件。MDM2 作为另外一个重要的原癌基因，其能与抑癌基因P53 结合并抑制其介导的蛋白表达关酶的活性阻碍细胞分裂，抑制其增殖。WTP53 能使损伤细胞阻滞于G1 期，使损伤DNA 得以及时修复，若修复过程难以顺利完成，则损伤细胞被诱导发生程序性凋亡以防止其进一步恶性增殖。P53 基因突变与结肠癌的关系P53 基因在结肠癌中突变率极高，其第175、245、248、249、273 和282 位等6 个位点的突变率最高，约为总突变的75 %，与结肠癌相关的42 个点突变主要集中于第90   289 之间，其第170   280 为高变区。P53 通过对下游靶基因的表达调控，影响细胞分化，促成肿瘤的发展。若P53 基因由野生型转变为突变型，原癌基因便得以激活，成功表达相关产物，最终导致结肠癌的发生;另外，突变型P53基因还能削弱野生型P53 基因对肿瘤细胞的抑制能力，促进结肠癌的发生。若WTP53 缺乏或突变为MTP53，将失去对损伤细胞的免疫监视功能，损伤细胞无法停留在G1 期进行DNA 修复，进一步恶性增殖。大量实验证明，P53 基因在结肠癌的发生中扮演着重要角色。马鹏等提出，P53 基因的异常表达是结肠癌癌前病变和异常增生的重要影响因素。李铁灵等的实验证明，P53 基因的表达水平与淋巴转移及远处转移具有相关性，P53 基因可作为结肠癌预后评估的参考因素。
　　2 中医对结肠癌的认识
　　2.1 结肠癌的病名及病因病机
　　中医学从先秦时期便开始认识到结肠癌的发病，但并无关于结肠癌病名的专述，其对该病的论述散见于积聚、肠僻、 脏毒等。脾胃亏虚，运化失司，痰湿内生，蕴久化热，出现痰、湿、热、瘀、毒阻滞肠腑。辨证以脾肾亏虚、气血不足为本，痰、湿、瘀、热、毒等为标，二者互为因果。
　　2.2 结肠癌的辩证及治疗
　　结肠癌早期多为痰、湿、热、毒、瘀阻，后期间杂脾肾亏虚、气血不足等正气亏虚之象，整个病程虚实夹杂。吴继萍根据临床表现将大肠癌分为脾虚湿毒、湿热瘀毒、脾肾两虚、气血两虚、肝肾阴虚等五个证型。早期治疗应以清化湿热、散瘀解毒为基本原则;病至晚期，正气亏虚，邪实壅盛，主以补虚兼解毒行瘀。《医宗必读》提出分期论治，屡攻屡补，以平为期，分初、中、末三个阶段辨证论治。尤杰等[20] 提出扶正治癌学术思想，认为肿瘤的发生多因正虚为本，邪实为标，阴阳偏衰，平衡失调。结肠癌的治疗当扶正固本，补虚泻实，温阳益肾、健脾理气，固护机体正气。
　　3 中药治疗结肠癌对P53 表达的影响
　　3.1 中药治疗与结肠癌野生型P53 表达部分
　　传统中药有抗肿瘤，扶正气、提高机体免疫力的功效，其应用于结肠癌的治疗时，会影响肿瘤细胞的信号转导，野生型P53 基因的表达亦受到干扰。结肠癌的发病，是一个多因素的致病过程，近年来有诸多关于中药运用于结肠癌干扰肿瘤细胞相关信号分子表达的研究报道。张丽发现苦豆碱(Aloperine，ALO) 可使人结肠腺癌细胞株HT29 细胞阻滞在G2/M 期，通过抑制周期蛋白Cyclin B1 和CyclinD1、上调P53 和P21 的表达，从而抑制细胞增殖。陈彬彬[22]研究发现，黄连素能使野生型P53 表达上调。贺志云[23] 用Western Blotting 检测发现，和厚朴酚(HNK)能使hMLHl 缺陷型人结肠癌HCT116 细胞的P-P53 蛋白表达上调。罗强[24]研究姜黄素对人结肠癌SW620 细胞增殖的影响，结果提示P53 基因表达水平升高、Bcl-2 基因表达下调(P0.05)，姜黄素对SW620 细胞增殖的抑制效果明显(P0.05)，且呈现剂量依赖性。此外，部分学者研究了中药复方制剂对结肠癌细胞野生型P53 表达的影响。阮善明通过观察含清热解毒中药小鼠血清对结肠癌CT-26 细胞蛋白Bax、P53、Caspase-3 等表达的影响，研究发现实验组 Bax、P53、Caspase-3 蛋白的表达升高。于向洋研究复方木鸡颗粒(木鸡)对不同 P53 基因型的人结肠癌细胞的抑制作用，MTT 法检测结果显示，木鸡能抑制不同 P53 基因型的人结肠癌细胞的生长。众多研究结果表明，中药上调野生型P53 表达，影响结肠癌细胞信号的转导，抑制结肠癌的发生发展。
　　3.2 中药治疗与结肠癌突变型P53 表达
　　一些研究者认为突变型P53 丧失原有的抑癌功能，机体免疫监视功能下降，损伤细胞难以及时修复，也难以发生细胞凋亡，导致受损细胞得以继续存活，甚至发生无限性增殖。近年来，不少学者就中药运用于结肠癌患者后，有关突变型P53 基因表达的变化进行了研究。彭燕在实验中用不同浓度的氧化苦参碱(Oxymatrine, OM)干预LOVO 细胞，采用荧光定量PCR 法检测药物对基因P53 表达的影响，结果发现P53 基因表达下调。范钦[研究九香虫含药血清对SW480细胞生长的影响，荧光定量PCR 及Western blot 结果显示，九香虫含药血清可使突变型P53 基因、蛋白表达显著降低，从而诱导人结肠癌细胞发生凋亡。
　　4 展望与不足
　　近年来对中药有效单体抗结肠癌的研究报道越来越多，中药因其多靶点、多环节和多途径的抗肿瘤作用，且毒副作用小等独特优势，日渐成为临床抗肿瘤药物研究的热点。随着科学家们对肿瘤生物学机制的逐步认识，新的治疗方法和治疗手段不断涌现，其治疗趋向多手段的联合治疗。中药在扶助正气、提高机体免疫力的同时，还能减轻放、化疗的副作用，提高生存质量。积极探索天然药物单体成分对结肠癌的作用机制，对开发新的抗结肠癌药物意义重大。随着对肿瘤分子生物学机制研究的不断深入，人们逐渐认识到DNA 遗传信息紊乱是恶性肿瘤发生的根源，原癌基因和抑癌基因在整个调控过程中扮演着重要角色。P53 基因的表达是影响结肠癌发病的重要因素，但任何一种肿瘤的发生都是众多因素共同作用的结果，尽管目前已有不少研究证明，中药可以通过对P53 基因表达的调控，抑制结肠癌的发生，但其具体机制仍有待进一步探索。