液相色谱仪色谱柱使用指导及维护方法，知道越多对工作越好

　　液相色谱仪
　　每天用足够的时间来平衡色谱柱，您会在处理问题方面获得至大的＂补偿＂，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！
　　新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
　　卡套柱的安装（不加预柱）
　　1．将卡套架套入柱芯；
　　2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套；
　　3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片；
　　4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧；
　　5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端；
　　6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手。
　　注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
　　色谱柱
　　卡套柱的安装（加预柱）
　　1．将卡套架套入柱芯；
　　2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯；
　　3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片；
　　4．将＂子弹头＂预柱放入卡套片内；
　　5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧；
　　6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端；
　　7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
　　更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）。
　　注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
　　1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端；
　　2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧；
　　3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网；
　　4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料；
　　5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平；
　　6．照装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端；
　　7．柱芯顶端套上2，然后参照将滤网放入；
　　8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 。
　　平衡色谱柱，反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水＂过渡＂。
　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
　　如何平衡色谱柱？
　　平衡过程中，将流速缓慢地提高
　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）
　　色谱柱的再生，进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议至好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
　　建议用来冲洗的溶剂体积
　　色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
　　125-4 1.6ml 30ml
　　250-4 3.2ml 60ml
　　250-10 -20ml 400ml
　　请根据下表选择您的再生方法：
　　极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
　　非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
　　水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水
　　0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
　　注意：
　　在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
　　如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
　　色谱柱的维护
　　1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）；
　　2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围；
　　3．避免流动相组成及极性的剧烈变化；
　　4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理；
　　5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中；
　　6．压力升高是需要更换预柱的信号。