6动物模型构建大鼠模型构建服务

　　6-OHDA是多巴胺的羟基化衍生物，化学结构与多巴胺类似，具有神经毒性，能够通过多巴胺或去甲肾上腺素转运体进入神经元，选择性破坏多巴胺能神经元，造成黑质纹状体中的多巴胺能神经元的大量丢失，进而模拟PD的病理学和行为学特征。
　　6-OHDA立体定向损毁黑质纹状体建立偏侧PD模型是目前应用最为广泛的动物模型之一。6-OHDA立体定向注射单侧黑质纹状体系统，多巴胺能神经细胞被选择性毁损，使得两侧大脑半球机能不对称，损毁侧 DA 含量减少，引起偏侧损伤。给予多巴胺受体激动剂阿扑吗啡（APO）皮下注射后，出现向健侧旋转。研究表明，黑质纹状体系统损毁程度与APO诱导后大鼠健侧旋转圈数呈正相关。且出现旋转行为可以量化，持续时间长，易于观察，是评价和筛选治疗 PD 药物疗效的可靠指标。该模型具有 DA 病变的可预测性、稳定性且病变程度严重，因此对于评估长期药理治疗或神经转运作用的研究特别有用。
　　建模方法：
　　动物：实验选择体重250-300g健康SD大鼠，雌雄不限。
　　饲养：动物订购之后需要至少适应性饲养1周后再进行造模手术。
　　脑定位注射：在33G的Hamilton注射器或玻璃电极中预先吸入1 μL左右浓度为3 μg/mL的6-OHDA溶液。小鼠麻醉后固定在脑立体定位仪上。剪开头皮后用棉签轻轻擦拭颅骨表面将前囟（bregma）和后囟（lambda）点暴露出来。调节立体定位仪，将前囟和后囟点的高度调节到一致从而使颅骨保持水平。以bregma点为原点，找到注射位点所在的坐标，用牙科钻将注射位点上方的颅骨钻开一个小洞。在6-OHDA诱导的模型中，注射位点可以是黑质（AP -2.90 mm; ML +1.10 mm; DV -4.50 mm），也可以是前脑内侧束（AP -1.20 mm; ML +1.10 mm; DV -5.00 mm）或纹状体（AP +0.2 mm; ML ±2.00 mm; DV -2.60 mm）。将玻璃电极或注射针缓慢插入注射位点，以0.2 μL/min的速度将6-OHDA注射到目标脑区。注射结束后，注射针应该继续停留在注射位点5分钟左右以使药物能够充分扩散。提起注射针，将动物的头皮缝合并消毒。
　　术后护理：脑定位注射完成后将动物放在加热板或灯光下照射保持体温。待动物苏醒后放回笼中。术后3天内每天腹腔注射一次抗生素。3周后可以进行行为学检测。
　　检测方法和结果
　　阿扑吗啡不对称旋转测试：腹腔注射，0.5mg/kg。阿扑吗啡诱导旋转行为阳性时，大鼠多以旋转侧前肢为支撑点向损伤对侧的原地转动。动物的旋转行为监测持续30min，超过5次/min，作为PD建模成功的定量指标。
　　平衡木测试：运动平衡能力评估
　　转棒测试：运动协调能力评估
　　TH染色：多巴胺能神经元损伤评估
　　Iba1染色：小胶质细胞特异性钙结合蛋白，评估炎性反应。
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